高通量实时荧光定量PCR仪
发布人:汤玉  发布时间:2023-08-16   浏览次数:869
 高通量实时荧光定量PCR仪     预约

管理人员黄婷妹仪器型号
罗氏 Light cycler 480II
联系电话021-54341003放置位置

闵行校区生科院132

使用方向对外开放仪器状态
正常

      

仪器收费标准(院内、院外、校外): 

院内:40 元/小时 

院外:80 元/小时  

校外:160 元/小时

           

技术参数:

◆ 温度均一性:± 0.1 ℃

◆ 可检测荧光染料:SYBR Green I、Hex、CyCyan 500、 FAM、VIC等

◆ 样品孔数:384个

◆ 动力学范围广:可同时检测到 1 - 10E10个拷贝DNA

◆ 高分辨率:轻松区分 1,000 与 2,000 拷贝浓度差异

◆ 高速:40 min 完成 40 个 PCR 循环(384孔板)


仪器主要功能及应用:

主要功能

◆ 可以实时在线进行高通量快速荧光定量PCR循环

◆ 可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析

◆ 可以进行多重PCR检测,并适用于多种检测模式用于基因表达分析研究,对目的基因的定量分析,进行SNP单核苷酸多态性和突变位点的分析检测

应用

◆ 非序列依赖的探针模式(SYBR Green I或其他饱和荧光染料)

◆ 序列特异的探针模式(Taqman水解探针模式,杂交探针模式,简单探针模式,分子信标,Scorpions等模式)

◆ 通过高分辨率熔解曲线分析(HRM)进行基因扫描突变检测,产物分型和SNP研究


仪器使用步骤及注意事项:

1. 操作步骤

a. 主机提前开启预热,开关在后方。

b. 按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成 384 孔板,注意板缺口向右下角。

c. 开计算机,打开LightCycler 480 软件,账号和密码贴在仪器旁边。

d. 软件开启后,点选 “New Experiment”,出现实验设定窗口:

a) 在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Format,再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。

b) 输入反应体积:384 well plate ,范围为 5 - 20 μL。

c) 设定实验步骤 (Program):

首先:设定 program,包含有 Pre-incubation、 Amplification (PCR)、 Melting curve (optional) 与 Cooling。

设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR)  program设定成 『Quantification』,而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。

d) 点选各个 program 设定详细温度变化步骤。需要设定的参数包含 Target (℃) 目标温度、Acquisition Mode (荧光侦测模式)、Hold (hh:mm:ss) 停留时间。

Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度。注意:若设定温度低于 50 ℃,请把 Ramp Rate 调整成 1.5 ℃/s ( 96 well ) 或 2.0 ℃/s ( 384 well )。

e) 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。

f) 若要进行套用时,请直接点选窗口左下角 “Apply Template”,选择欲套用之实验步骤即可。

g) 设定完成后点选 “Start Run” 开始进行实验.

h) 跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。


2. 注意事项

a. 实验完毕请将样品板带走,勿留在仪器内。

b. 进板或者出板请勿用手协助,以免引起程序混乱出错。